衡水名师专项检测细胞(衡水名师调研卷)

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求推荐靠谱的体外细胞毒性检测机构

要做体外细胞毒性检测还是要去专业点的地方,推荐你去广州市微生物研究所,该所:集产品检测、技术研发、标准制定、学术交流、人才培养、科普教育于一体的综合性检测机构.中心质量管理体系符合ISO/IEC17025的要求,出具的检测数据在亚太实验室认可合作组织(APLAC)和国际实验室认可合作组织(ILAC)内相互认可,广泛应用于贸易出证、产品质量评价、成果鉴定,作为公证数据,具有法律效力。百度上面有这方面的资料。

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细胞活性检测的方法有多少种 ?每种的原理是什么?

在目前的细胞活性检测方法中,MTT法是较早且较为经典的方法。但是,由于MTT法形成的甲物是非水溶性的,需要加有机溶剂溶解,这不仅增加了研究人员的工作量,也给实验带来了一定的误差。在这里我们向大家介绍一种国外最新检测方法—CCK-8法,它具有方便、灵敏、快速、无放射性、重复性好的特点。现在已广泛用于细胞增殖检测、细胞毒性检测、药物筛选、药敏试验等。

另外还将向大家介绍几种氧化应激和蛋白质抗体标记的新方法。

内容:

1、新型细胞活性检测方法介绍

2、国外氧化应激测定方法介绍

3、蛋白质抗体标记的新方法介绍

原理恕在下不知

检测细胞增殖的种类以及方法步骤

目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法,通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法,即细胞活力(cell viability)检测方法,通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然,细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序,但药物的干扰可抑制凋亡的发生;这时若采用细胞活力检测法,显然可以区分两种条件下的细胞数量,但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。所以最直接的证据应该采用方法一。

用于检测细胞增殖能力最经典的方法是用氚标记的胸腺嘧啶核苷处理细胞,再检测DNA链中氚含量。若细胞具有增殖能力,DNA合成过程中将会采用氚标记的胸腺嘧啶核苷作为合成原料,因此检测细胞DNA链内标记核苷酸的量可判断细胞是否进行DNA的合成。

但更为常用的方法是BrdU检测法。用BrdU预处理的细胞中,BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中,而且这种置换可以稳定存在,并带到子代细胞中。细胞经过固定和变性处理后,可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量(如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记,最后用比色法或荧光的方法进行定量测定),从而判断细胞的增殖能力。

Calbiochem/EMD公司提供一种BrdU检测试剂盒,以微孔板的形式,合并所有清洗、固定、变性的步骤以单一试剂当中。比色检测在一抗二抗标记后在450nm下读数,所有操作在3小时内结束。而且该试剂盒的灵敏度与市场上其他同类产品相比是最强的。1000个细胞以上水平的检测只需用BrdU预孵育2小时,100个细胞则采用过夜预孵育,即可检测细胞的增殖能力。

BrdU法的一个缺点是需要固定和变性等破坏DNA的处理。有些情况下,研究者可能希望在测定细胞增殖能力的同时检测细胞的总DNA含量,然而,在变性条件下,DNA的双链结构将被破坏,DAPI和Hoechest 33342等核酸标记探针就不再能识别DNA,因而也无法估计DNA总量。Molecular Probes公司的Click-iT EdU(5-乙炔-2'-脱氧尿嘧啶)检测试剂盒可以解决这个问题。这种方法不需要变性步骤,因为荧光探针标记的叠氮化物小分子,而不是庞大的抗体分子,可以很轻易的识别并结合未变性DNA双链中的EdU分子。

采用BrdU方法时,你必须非常小心的去对DNA进行变性,才能一方面使BrdU抗体进入细胞,另一方面又保留足够的双链DNA分子来进行细胞周期的分析。有了EdU后则不同,由于你不再需要变性,这一切都很简单了;另外,常常用于DNA变性的HCl,可能破细胞内坏蛋白的抗原识别位点,因而限制了BrdU检测法中同时检测其他蛋白的应用,但这种情况在EdU法中不存在。

图1:EdU及BrdU原理示意图(摘至invitrogen说明书)

在一些情况下,细胞活力的检测相当于细胞增殖能力的测定。用于细胞活力检测的方法又很多,这些方法主要采用特殊的试剂来测定细胞的代谢活力,Alamar Blue,MTT及其他四唑盐。它们通过检测细胞的氧化还原活性来检测细胞增殖能力,所以这是一种间接的方法。

Calbiochem的快速细胞增殖试剂盒,或者,严格来说,叫细胞活力试剂盒,采用一种四唑盐试剂WST-1来对细胞活力进行快速的检测。线粒体剪切WST-1试剂,产生一种水溶性的formazan盐,所以这是一种相对可靠的测定健康细胞活力的方法。一种类似的但更为灵敏的方法是Calbiochem公司的超敏细胞增殖试剂盒,采用calcein-AM(一种荧光探针)来标记细胞。这种增加的灵敏度来自于额外的检测步骤,即采用PBS替代培养基或血清来减小背景。

Invitrogen公司还提供了一种采用荧光素酶检测细胞内ATP水平的方法。健康细胞中荧光素激发出的光可以很容易读出,并且具有非常小的背景。无荧光信号表明细胞线粒体不在产生ATP。因此,这些方法当然也可用于细胞毒性检测实验。

细胞增殖检测方法:总论

一、胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法

胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的碱基,也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程,通过测定细胞的放射性强度,可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。

二、MTT检测法

MTT检测法主要反映细胞的能量代谢,是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法,其原理是在活细胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲(Formazan),生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比

三、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)检测法

羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团,使C E成为一种良好的细胞标记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时,CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样,在一个增殖的细胞群中,各连续代细胞的荧光强度呈对递减,利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。

四、Brdu检测法

Brdu中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷,为胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期),活体注射或细胞培养加入,而后利用抗Brdu单克隆抗体,ICC染色,显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物,双重染色,可判断增殖细胞的种类,增殖速度,对研究细胞动力学有重要意义。

刘光伟简介及详细资料

中科院动物研究所研究员

研究领域:

刘光伟 中科院研究员

巨噬细胞和T细胞免疫耐受规律及其分子调控机制研究

代表论著:

Liu G.W., S. Burns, G.H. Huang, K. Boyd, R.L. Poria, R.A. Flavell, and H.B. Chi (2009). The receptor S1P1 overrides regulatory T cell-mediated immune suppression through Akt-mTOR. Nature Immunology, 10: 769-777.

H.X. Ma, Liu G.W., W.J. Ding, Y. Wu, L. Cai, Y. Zhao (2008). Diabetes-induced immunodeficiency of F4/80+ macrophages: a study in streptozotocin-induced type 1 diabetic mice. J of Mol Med, 2008, 86: 391-400.

S.L. Gong, L.H. Dong, Liu G.W., P.S. Gong, W.T. Lu, H.G. Zhao, X.J. Jia, Y. Zhao (2008). Effect of corticosterone, cAMP, cGMP, Ca2+ and PKC on apoptosis of thymus lymphocyte in vitro in mice induced by X-irradiation. Biomed and Envir Sci. 21:167-172.

Liu G.W., P.S Gong, L.R. Berstein, Y. J. Bi, S. L.Gong, Cai L (2007). Apoptotic cell death induced by low-dose radiation in male germ cells: hormesis and adaptation. Crit Rev Toxicol, 37: 587-605.

Liu G.W., H.X. Ma, L.L. Jiang, J.X. Peng and Y. Zhao (2007). The immunity of normal F4/80+ resident macrophages in mixed allogeneic chimeras. J of Mol Med, 85: 1125-1135.

Liu G.W., Y. Zhao (2007). Toll-like receptors and immune regulation: their direct and indirect modulation on regulatory CD4+CD25+ T cells. Immunology. 122: 149-156.

L. Zhao, H.J. Wang, L.G. Sun, H.X. Ma, Liu G.W. and Zhao Y (2007). The changes of CD4+CD25+ regulatory T cells in aged mice. J of Leukocyte Biology. 81: 1386-1394.

Liu G.W. and Y. Zhao (2007). A New subset of CD4+T cells: Th17 and its immunobiological function. Prog in Biochem and Biophy, 34: 125-166.?

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Liu G.W., H.X. Ma and Y. Zhao (2006). The nonopsonic allogeneic cell phagocytosis of macrophages detected by flow cytometry and o photon fluorescent microscope. Transplant Immunology, 16: 220-226.?

Liu G.W., C.L. Wu and Y. Zhao (2006). Phagocytosis of apoptotic cells and immune regulation. Scand J Immunol, 64: 1-9.

Liu G.W., Y. Wu, S.L. Gong and Y. Zhao (2006). Toll-like receptors and graft rejection. Transplant Immunology, 16: 25-31.

Liu G.W., H.X. Ma and Y. Zhao (2006). Allograft inflammatory factor-1 and transplant reaction. Autoimmunity, 225:1-8.

Liu G.W., P.S. Gong, H.G. Zhao, Z.C. Wang, S.L. Gong and L. Cai (2006). Effect of low-level radiation on male germ cell death. Radiation Research, 165: 379-389.

S.L. Gong, G. Zhao, H.G. Zhao, W.T. Lu, Liu G.W. and P. Zhu (2004). Ability of luteinizing hormone releasing hormone-Pseudmonas aeruginosa exotoxin 40 binding to LHRH receptor on human liver cancer cells. World Journal of Gastroenterology, 10: 2870-2873.

衡水学院讲师

男,衡水学院名师。2002年毕业于河北师范大学,学制四年,套用电子技术教育,工学学士学位,02年毕业分配到衡水学院工作,担任过的课程有《信息技术基础》、《C语言程式设计》。曾教授过《电路》、《数字电路》、《高等数学》等。

刘光伟 衡水学院讲师 主任医师 个人简介

刘光伟,男,丰胸吸脂新一代领军人,主任医师 教授

刘光伟 个人成就

●"章子怡替身"邵小珊吸脂减肥主力专家

●曾求学第二军医大学获硕士学位

●东亚医学整形联合会主任委员

●旅韩多年,深得微创技术精髓

学术方向

擅长项目

假体隆胸、自体丰胸、身体吸脂塑形等

技术特点

精益求精,处处追求完美,一流的术后效果令人叹为观止

特别推介

无创整形席卷日、韩,并由于其恢复迅速,安全性高,在精细化水平和术后效果上远远超出传统整形技术,成为日韩主流,被广泛运用于丰胸、减肥领域。

个人 ***

S身材既是每个女人的毕生追求

也是他为女人追求美的目标

精致典雅的脸、坚挺动感的胸

纤瘦细嫩的腰、修长净白的腿

都是他最擅长雕画的艺术

女人要美 就美得光鲜靓丽

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因为精细 他创造让人叹为观止的美

他就是刘光伟、著名美胸、吸脂整形专家

衡水名师堂培训机构怎么样啊

好。衡水名师堂是由高考教育专家和衡水高中多名一线老师共同组建的艺术生文化课辅导学校,依托衡水优厚的教育资源和氛围,专业从事高考前文化课百日冲刺。

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