本篇文章给同学们谈谈蛋白质周测卷,以及蛋白质选择题对应的知识点,希望对各位同学有所帮助,不要忘记分享给你的朋友哦!
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蛋白质浓度的测定
通常用的蛋白质浓度测定方法是Bradford 、BCA 以及在280 nm 处的光吸收。实验室倾向于选择一些特定的方法,在订购新的试剂前先试用实验室的常规方法。Brad ford法是最好的一种可以用来满足所有目的的方法。
不能直接用一种方法的结果与另一种方法进行比较,必须相对浓度来比较,例如,用Bradford 法测量到的牛血清清蛋白的量比其称量的值高两倍。
蛋白质样品的特点决定选择何种测量方法。如果知道纯化的蛋白质中没有色氨酸,就不要依赖280nm的光吸收值。如果蛋白质样品中有去污剂,就必须选择一种对去垢剂不敏感的方法,或者去除去污剂。
用任何一种方法测量未知样品都要依据标准曲线,而且每次测量时都一样。如果要知道相对蛋白质的浓度,任何纯化的蛋白质都必须选择一条参考的曲线。牛血清清蛋自(BSA) 和lgG 是通常用的参照蛋白质,除非要测量抗体,一般都使用BSA 。
BCA
工作原理:将硫酸铜加到BCA (bicinchonic acid) 的碱性溶液中,产生一种苹果绿颜色混合物,当溶液中加入蛋白质样品时, Cu2+ 与蛋白样品中的肽键相互作用转变成Cu+,混合物的颜色转变成紫色,在562 nm下有最大吸收值。
优点:快速、灵敏、准确。
缺点:受到去污剂和有机溶剂的影响,有时间依赖性,颜色会在24 小时发生变化。
Bradford
工作原理:染料考马斯亮兰G250 在pHl 时呈红棕色,与蛋白质结合后引起pKa值的变化,颜色就会变蓝,蓝色强度可以在595 nm 测量。
优点:快速、灵敏、准确、没有时间依赖性。
缺点:去污剂的浓度不能超过0.2% ,否则会干扰测量的结果。
280 nm 光吸收值
工作原理:芳香族氨基酸,尤其是色氨酸,在280nm有强烈的光吸收。所有的蛋白质都有芳香族氨基酸(或者紫外吸收因子),在280nm有独特的消光系数。
优点:快速,样品不会受到干扰。
缺点:没有其他方法准确。
双缩脲法(Biuret)
工作原理:测量肽键,在540nm测定OD值。
优点:快速,由于盐浓度的干扰比Bradford 法小,可用于追踪蛋白质分离过程。
缺点:低浓度时测量不准确。
Lowry (Folin-Ciocalteu) 法
工作原理:与BCA 法类似, 在750nm测定OD 值。
优点:需要很少的物质。
缺点:取决于蛋白质样品中酪氨酸的存在。
[img]蛋白质测定
蛋白质的测定方法如下:
检查前准备:
准备待测蛋白质溶液,如血清蛋白等,用蒸馏水稀释蛋白质溶液;如为固体蛋白质,应在105℃环境下烘干。
操作方法:
1、凯氏定氮法。准备4个50ml凯氏烧瓶并标号,想1、2号烧瓶中加入定量的蛋白质样品,另外两个烧瓶作为对照,在每个烧瓶中加入硫酸钾-硫酸铜混合物,再加入浓硫酸,将4个烧瓶放到消化架上进行消化,之后进行蒸馏,全部蒸馏完毕后用标准盐酸滴定各烧瓶中收集的氨量,直至指示剂混合液由绿色变回淡紫红色,即为滴定终点,结算出蛋白质含量。
2、双缩脲法。双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。首先利用标准蛋白溶液和双缩脲试剂绘制标准曲线,将待测血清与硫酸钠在待测试管中混合,并用只加入硫酸钠不含血清的试管作为对照。
将两支试管加入等量的双缩脲试剂,充分混合后于37℃环境中放置10分钟,在540nm波长进行比色,以对照管调零,读取吸光度值,由标准曲线上直接查出蛋白质含量。双缩脲法常用于0.5g/~10g/L含量的蛋白质溶液测定。
如何检测蛋白质的步骤
我们的生活离不开蛋白质,这里,我带大家学习一下检测蛋白质的步骤。
01
首先是选择高蛋白的食物浆液,比如豆浆和蛋清。然后准备检测蛋白质的双缩脲试剂,由A液和B液组成,A液:氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液。B液:硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。
02
在实验时,需要现在待测液体中先在加入A液,先制造出碱性环境,满足B液与蛋白质反应的条件,这样才可以方便进行蛋白质的检测。
03
放入1ml的A液后,再加入4滴B液在试管中,然后充分震荡使其混匀,观察其反应。
04
一段时间后,如果试管中的液体变为紫色,说明待测液体中含有蛋白质,而且颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
高一生物综合检测试卷
加强生物试卷的练习,巩固好已学的知识点。下面是我收集整理的 高一生物 综合检测试卷题目以供大家学习。
高一生物综合检测试卷:
一.选择题(下列各题均有四个选项,其中只有一个是符合题意要求的,30题共45分)
1.一片森林中的桉树苗、小桉树、大桉树组成一个 ( )
A.个体 B.群落 C.种群 D.生物
2.下列组合,在生命系统的层次中依次属于种群、群落和生态系统的一组是 ( )
①一个池塘中的全部生物 ②一片草地上的全部昆虫
③某水库中的全部鲫鱼 ④一根枯木及枯木上的所有生物
A.③①④ B.①②④ C.①②③ D. ②③④
3.下列物质在元素组成上最相似的一组是 ( )
A.麦芽糖、维生素D、生长激素 B.纤维素、胰岛素、性激素
C.糖原、肽酶、脂蛋白 D.ATP、DNA、RNA
4.水绵、蓝藻、黑藻全部 ( )
A.是真核生物 B.含有叶绿体 C.是自养生物 D.能有丝分裂
5.关于下列生物细胞结构的说法不正确的是 ( )
A.酵母菌有染色体,而硝化细菌没有 B.酵母菌有核糖体,而硝化细菌没有
C.黑藻细胞有线粒体,而蓝藻细胞没有 D.黑藻细胞有叶绿体,而蓝藻细胞没有
6.下列关于细胞中水的含量的叙述,不正确的是 ( )
A.水是人体细胞中含量最多的化合物 B. 抗冻的植物细胞内自由水含量大
C. 老年人细胞中含水量比婴儿的少 D.新陈代谢越旺盛,细胞中的自由水含水量越高
7.下列核苷酸不可能属于DNA初步水解产物的是 ( )
8.下列关于细胞的结构和功能的叙述,哪项是正确的 ( )
A.硝化细菌、霉菌、水绵的细胞都含有线粒体、核糖体、DNA和RNA
B.能进行有氧呼吸的细胞一定含有线粒体,含线粒体的细胞每时每刻都在进行有氧呼吸
C.蓝藻和衣藻因为有叶绿体所以都能进行光合作用
D.蛙红细胞、人脑细胞、洋葱根尖分生区细胞并不都有细胞周期,但这些细胞内的化学成分都在不断更新
9.下列关于“检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质”实验的操作步骤的叙述中,正确的是 ( )
A.用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液,可直接用于蛋白质的鉴定
B.用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后,再加入含样品的试管中,且必须现混现用
C.鉴定可溶性还原糖时,要加入斐林试剂甲液摇匀后,再加入乙液
D.脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴
10.已知20种氨基酸的平均相对分子质量是128,现有一蛋白质分子由两条多肽链组成,共有肽键98个,问此蛋白质的相对分子质量最接近于 ( )
A. 12800 B. 12544 C. 11036 D. 12288
11.烟草、烟草花叶病毒这两种生物中,构成核酸的碱基的种类依次是 ( )
A.4、4 B.8、4 C.5、4 D.7、4
12.已知Mn是许多酶的活化剂,例如能激活硝酸还原酶。缺Mn的植物就无法利用硝酸盐,这说明无机盐离子 ( )
A.对维持细胞形态和功能有重要作用 B.对维持细胞内渗透压有重要作用
C.对维持细胞的酸碱平衡有重要作用 D.对维持生物体的生命活动有重要作用
13.不具有膜结构的细胞器是 ( )
A. 中心体与核糖体 B. 染色体与核糖体
C.内质网与线粒体 D.高尔基体与线粒体
14. 温室栽培可不受季节、地域限制,为植物的生长发育提供最适宜的条件,有利于提高作物品质和产量。在封闭的温室内栽种农作物,以下哪种 措施 不能提高作物产量 ( )
A.增加室内CO2浓度 B. 采用绿色玻璃盖顶 C.增加光照强度 D. 增大室内昼夜温差
15.能够促使淀粉酶水解的酶是 ( )
A.淀粉酶 B. 脂肪酶 C.蛋白酶 D.麦芽糖酶
16.在光合作用中,不需要酶参与的过程是 ( )
A.CO2的固定 B.叶绿素吸收光能 C.三碳化合物的还原 D.ATP的形成
17.下列人体细胞中分化程度最低的是 ( )
A. 肌肉细胞 B.造血干细胞 C.胰腺细胞 D. 胚胎干细胞
18.ADP转变为ATP需要 ( )
A.Pi、酶、腺苷和能量 B.Pi、酶 C.酶、腺苷和能量 D.Pi、酶和能量
19.下图为某 种植 物在夏季晴天的一昼夜内CO2吸收量的变化情况,正确的判断是 ( )
A.影响bc段光合速率的外界因素只有光照强度 B.ce段下降主要是由于气孔关闭造成的
C.ce段与fg段光合速率下降的原因相同 D.该植物进行光合作用的时间区段是bg
20.下列有关细胞器的说法正确的是 ( )
A.核糖体是噬菌体、细菌、酵母菌唯一共有的细胞器
B.线粒体是有氧呼吸的主要场所,在其中生成的产物有丙酮酸、二氧化碳和水
c.在植物细胞有丝分裂的末期,细胞中的高尔基体活动加强
D.叶绿体是所有生物进行光合作用的场所,含有DNA、RNA、蛋白质和磷脂等成分
21.蔬菜和水果长时间储藏、保鲜所需要的条件为 ( )
A.低温、干燥、低氧 B.低温、湿度适中、低氧
C.高温、干燥、高氧 D.高温、适度适中、高氧
22.在细胞呼吸过程中有CO2放出时,则可判断此过程 ( )
A.是无氧呼吸 B.是有氧呼吸 C.不是乳酸发酵 D.不是酒精发酵
23.很多生物学实验都需要制作临时装片,在显微镜下观察,下列实验步骤不正确的是 ( )
A.脂肪的鉴定:切取花生子叶薄片→染色→洗去浮色→制片→观察
B.观察细胞中叶绿体:取黑藻幼嫩小叶→染色→制片→观察
C.察观察细胞有丝分裂:解离洋葱根尖→漂洗→染色→制片→观察
D.观察细胞质壁分离:制作洋葱鳞片叶表皮装片→观察→滴入0.3g/mL蔗糖溶液→观察
24.姐妹染色单体的形成和消失分别发生在细胞周期的 ( )
A. 前期、后期 B. 间期、后期 C. 间期、末期 D. 前期、末期
25.下列仅属于植物细胞有丝分裂特征的是 ( )
A.由两组中心粒发出的星射线形成纺锤体 B.分裂间期染色体进行复制
C.分裂期的中期,着丝点排列在赤道板上 D.分裂期的末期,在细胞中部形成细胞板
26.有丝分裂过程中,着丝点分裂发生在 ( )
A.间期 B.前期 C.中期 D.后期
27.动物细胞有丝分裂区别于植物细胞有丝分裂的特点是 ( )
A. 核膜、核仁消失 B. 中心粒周围发出星射线
C. 形成纺锤体 D. 着丝点分裂
28.细胞有丝分裂中期,如果它的染色体数为N,DNA的含量为Q,则该细胞分裂后,每个子细胞中的
染色体数和DNA含量分别是 ( )
A. N和Q B. N/2和Q/2 C. N和Q/2 D. N/2和Q
29.细胞的全能性是指 ( )
A.细胞具有全面的生理功能 B.细胞既能分化,也能恢复到分化前的状态
C.已经分化的细胞全部能进一步分化 D.已经分化的细胞仍然具有发育成完整个体的潜能
30.癌细胞在人体内容易转移,其原因是癌细胞 ( )
A. 能无限增殖 B. 形态结构发生变化,常变球形
C.细胞膜上的糖蛋白等物质减少,使细胞彼此间的黏着性减少 D.畸形分化,体积减小
二.非选择题(除说明外每空1分共55分)
31.以下是某三肽的结构简图,请回答下列问题: (8分)
(1)该图所示为肽化合物,该化合物由__________ 个氨基酸组成,含__________种氨基酸,由______个肽键连接而成。该化合物水解时需 ___ 个H2O分子。
(2)写出氨基酸结构通式为 ,生成此化合物的反应叫 。
(3)现要合成由100个氨基酸组成的蛋白质,由氨基酸排列顺序不同而形成的蛋白质种类最多有 _______种。
32.右图为电子显微镜视野中观察到的某真核细胞的一部分,请分析后回答:(10分)
(1)此图是_______ 细胞亚显微结构示意图,判断的理由是 ____________________________ 。
(2)图中属于生物膜系统的是_______ (填序号)。
(3)物质代谢过程中可以产生水的细胞器除叶绿体、线粒体外,还有_______ 、 。
(4)若用甲基绿、吡罗红混合染色剂将右图细胞染色,在显微镜下看到的现象是_____________________: 。
(5)为研究细胞内各种组成成分和功能,需将细胞器分离。分离各种细胞器常用的 方法 是_____________________ 。
(6)若用丙酮从细胞中提取脂质,在空气——水界面上铺展成单分子层,测得的单分子层面积是否大于细胞表面积的2倍?_______,理由是
(7))此细胞是不是在中学实验室条件下观察线粒体的理想实验材料, _________,原因是
33.在一定实验条件下,测得某植物光合作用速率与光照强度之间的关系(氧气浓度为15%)、呼吸作用与氧气浓度之间的关系及光合作用速率与温度之间的关系如下图所示,请据图回答下列问题:(8分)
(1) 在光合作用过程中,光反应为暗反应提供了两种物质,请写出光反应中形成这两种物质的反应式:
①_________________________________________________;
②________________________________________________________。
(2)影响图甲中a曲线A点上下移动的主要外界因素是__________________;图乙中细胞
呼吸有关曲线的数据需在___________条件下测量。
(3)由图丙可知,40℃时,植物体_________________(填“能”或“不能”)显示生长现象;
而5℃时的状态可用图甲中___________________(填“A”、“B”或“C”)点表示。
(4)用大棚种植蔬菜时,白天应控制光强为__ _ 点对应的光照强度,温度为_____℃最佳。
34.在下面的横线上写出概念图中各数字的名称:(8分)
1 2 3 (填试剂名称)4 (填试剂名称)5 6 7 8
35.右图是一个细胞有丝分裂的示意图,据图回答问题:(8分)
(1)图中组成纺锤体的是由细胞两极发出的 形成的
(2)此细胞处于有丝分裂的 期。
(3)该细胞此时有 条染色体, 条染色单体, 个DNA分子;
(4)该生物体细胞中含 条染色体。
(5)此时期继续发展,将在赤道板位置出现 ,逐渐扩展形成 ,最终分裂为两个子细胞。
36.下图表示光合作用过程,请据图回答问题:(9分)
(1)光合作用分为两个阶段E、F,是在 和 (填细胞器)中进行的。
(2)图中A是 ,其功能主要是吸收 光和 光。
(3)在E阶段中物质的变化有:将水分解成B: 和[H];ADP和Pi生成ATP。
(4)在F阶段中,CO2被C5固定生成D: ,D最终被还原生成C5和(CH2O)。
(5)光合作用中,E阶段利用的能源是 ,F阶段利用的能源是 。
37. 实验探究:(每空2分共4分)
下列是一位同学探究酶特性的实验设计:
步骤 操作方法 试管
Ⅰ Ⅱ
1 注入可溶性淀粉溶液 2ml —
2 注入蔗糖溶液 — 2ml
3 注入斐林试剂 1ml 1ml
(1)该探究实验的假设是 。
(2)下面是步骤3的操作和实验可能出现的结果,正确的是
A.加入淀粉酶,Ⅰ试管出现砖红色沉淀
B.加入蔗糖酶,Ⅱ试管出现砖红色沉淀
C.加入淀粉酶,都不出现砖红色沉淀
D.加入过氧化氢酶,Ⅰ试管出现砖红色沉淀
究竟艾弗里格里菲斯的实验是不是证实了DNA是遗传物质?????我靠
格里菲斯不能证明DNA是遗传物质 而艾弗里能证明DNA是遗传物质 因为艾弗里将DNA、蛋白质等分离出来 一一进行了实验只有放入DNA发生了细胞转化 但是不能证明DNA是主要遗传物质
怎样测定蛋白质的相对分子量?
测定蛋白质分子量的常用方法:
粘度法、凝胶过滤层析法、凝胶渗透色谱法、SDS-凝胶电泳、渗透压法、质谱法包括电喷雾离子化质谱技术和基质辅助激光解吸电离质谱技术、光散射法(多角度激光散射)、沉降法(超速离心法)。
1、粘度法
一定温度条件下,高聚物稀溶液的粘度与其分子量之间呈正相关性,随着分子量的增大,聚合物溶液的粘度增大。通过测定高聚物稀溶液粘度随浓度的变化,即可计算出其平均分子量(粘均分子量)。
如果高聚物分子的分子量愈大,则它与溶剂间的接触表面也愈大,摩擦就大,表现出的特性粘度也大。特性粘度和分子量之间的经验关系式为:
聚合物、溶剂性质有关,也和分子量大小有关。K值受温度的影响较明显,而值主要取决于高分子线团在某温度下,某溶剂中舒展的程度,其数值解在0.5~1 之间。K与的数值可通过其他绝对方法确定,例如渗透压法、光散射法等,从粘度法只能测定[η]。 在无限稀释条件下:
优缺点:该方法操作简单、设备价格较低,通常不需要标准样品,但无法测定聚合物的分子量分布。
2、凝胶过滤层析法
对同一类型的化合物,洗脱特性与组分的分子量有关,流过凝胶柱时,按分子量大小顺序流出,分子量大的走在前面。Ve与分子量的关系可用下式表示: V e=K1—K2logMr
K1与K2为常数,Mr为分子量,Ve也可用Ve—Vo(分离体积),Ve/Vo(相对保留体积),Ve/Vt(简化的洗脱体积,它受柱的填充情况的影响较小)或Kav代替,与分子量的关系同上式,只是常数不同。凝胶层析主要决定于溶质分子的大小,每一类型的化合物如球蛋白类,右旋糖酐类等都有它自己的特殊的选择曲线,可用以测定未知物的分子量,测定时以使用曲线的直线部分为宜。
优缺点:凝胶层析技术操作方便,设备简单,样品用量少,周期短,重复性能好,条件温和,一般不引起生物活性物质的变化,而且有时不需要纯物质,用一粗制品即可,目前已得到相当广泛的应用。凝胶层析法测定分子量也有一定的局限性,在pH6—8的范围内,线性关系比较好,但在极端pH时,一般蛋白质有可能因变性而偏离。糖蛋白在含糖量超过5%时,测得分子量比真实的要大,铁蛋白则与此相反,测得的分子量比真实的要小。
3、凝胶渗透色谱法
分子量的多分散性是高聚物的基本特征之一。聚合物的性能与其分子量和分子量分布密切相关。
SEC法是按分子尺寸大小分离的,即淋出体积与分子线团体积有关,利用Flory的粘度公式:
K1、K2、α1、α2可以从手册查到,从而由第一种聚合物的M-Ve校正曲线,换算成第二种聚合物的M-Ve曲线,即从聚苯乙稀标样作出的M-Ve校正曲线,可以换算成各种聚合物的校正曲线。
优缺点:凝胶渗透色谱法分离速度快、分析时间短、重现性好,进样量少、自动化程度高。但设备投入较大,价格较高。
4、SDS-凝胶电泳法
SDS是十二烷基硫酸钠的简称,它是一种阴离子表面活性剂,加入到电泳系统中能使蛋白质的氢键和疏水键打开,并结合到蛋白质分子上(在一定条件下,大多数蛋白质与SDS的结合比为1.4gSDS/1g蛋白质),使各种蛋白质-SDS复合物都带上相同密度的负电荷,其数量远远超过了蛋白质分子原有的电荷量,从而使其电泳迁移率只取决于分子大小这一因素,根据标准蛋白质分子量的对数和迁移率所作的标准曲线,可求得未知物的分子量。
优缺点:实验成本较低,仪器设备也相对很简单,一套电泳装置即可。但是精确程度相对较低,好的电泳图谱需要一定的技术。
5、渗透压法
在一种理想溶液中,渗透压与溶质浓度成正比。但是实际上蛋白质溶液与理想溶液有较大的偏差。在溶质浓度不大时,它们的关系可用下式表示:
当c 趋向于0时,RTKc 趋向于0,但π/c 不趋向于0,而是趋向于一定值。测定几个不同浓度下的渗透压,以π/c对c作图,并外推至c为0时的π/c,再代入上式求得Mr。
优缺点:操作简单、快捷,实验成本低,但准确度较差,受外界温度影响较大,且要准确配置蛋白质溶液。
6、超速离心沉降法
利用超速离心沉降法测蛋白质的分子量是在较低离心转速下进行的(8000~20000r/min),离心开始时,分子颗粒发生沉降,一段时间以后,沉降的结果造成了浓度梯度,因而产生了蛋白质分子反向扩散运动,当反向扩散与离心沉降达到平衡时,浓度梯度就固定不变了。
7、光散射法
主要基于染料阴离子在蛋白质等电点前与肽链上带正电荷的基团上的结合作用.。此时生色团聚集于蛋白质分子上引起共振散射光增强,它与核酸不同的是生色团必须是带负电荷的阴离子。
光散射计算的基本公式:
8、电喷雾离子化质谱技术
电喷雾离子化质谱技术(ESI-MS)是在毛细管的出口处施加一高电压,所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴,随着溶剂蒸发,液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子,致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相的质谱技术。ESI-MS 测定蛋白质大分子是根据一簇多电荷的质谱峰群,通过解卷积的方式计算得到蛋白质的分子量,由于ESI-MS可以产生多电荷峰,因此使得测试的分子质量范围大大扩大。
优缺点:(1)对样品的消耗少,不会造成样品的大量浪费;(2)对样品分子质量测试灵敏度、分辨力和准确度都相当高;(3)能够方便地与多种分离技术联用,如毛细管电泳、高效液相色谱等,是解决非挥发性、热不稳定性、极性强的复杂组分化合物的定性定量的高灵敏度检测方法。
9、基质辅助激光解吸电离质谱技术
基质辅助激光解吸电离质谱技术(MALDI-MS)是将待测物悬浮或溶解在一个基体中,基体与待测物形成混晶,当基体吸收激光的能量后,均匀传递给待测物,使待测物瞬间气化并离子化。基体的作用在于保护待测物不会因过强的激光能量导致化合物被破坏。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量传递给生物分子,而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子,而使生物分子电离的过程。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比(M/Z)与离子的飞行时间成正比,检测离子。
优缺点:(1)同ESI-MS 一样对样品的消耗很少;(2)随着质量分析器的不断改进、新的基质的不断发现和应用以及延迟萃取技术的使用,使得MALDI-MS 的最高分辨率不断提高,甚至超过ESI-MS;(3)MALDI-MS 单电荷峰占主要部分,碎片峰少,非常有利于对复杂混合物的分析,且能忍受较高浓度的盐、缓冲剂和其他难挥发成分,降低了对样品预处理的要求;(4)MALDI-TOF 质谱对生物大分子分子量的测定范围是所有测试技术中最广的。
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